图1. β-受体激动剂药物的LC/MS/MS色谱图（1ng/ml）。

对动物源性食品中的β-受体激动剂的分析研究，在临床药物代谢动力学、体育运动，以及食品安全方面都有重要意义。本文建立了猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋等食品中几种β-受体激动剂的残留检测方法，实验表明，该方法灵敏度、提取回收率、重现性等均满足国内外检测要求。

b-受体激动剂，又称为β-兴奋剂（β-agonists），是一类人工合成药物，主要用于防治人、兽支气管哮喘和支气管痉挛，在药学上称为β-肾上腺素兴奋剂。β-受体激动剂在体育比赛中可用于增强运动员、动物（如马）的肌肉，提高运动成绩，因此，国际奥委会将β-受体激动剂列为禁用药物。β-受体激动剂根据苯环取代基结构分为苯胺型（如克伦特罗，俗称瘦肉精）、苯酚型（如沙丁胺醇）、间苯二酚型（如特布他林）。

80年代，国内外研究表明，在饲料中添加β-受体激动剂具有营养再分配作用，可以明显提高瘦肉率。1992年，西班牙首次发生多人食用含β-受体激动剂的畜产品中毒事件；1997年，香港发生进食大陆供港猪的内脏引起人中毒事件。随着中国加入WTO后，国外对于中国出口的食品提出更高的要求，最近我国因兽药残留问题出口欧盟肉制品受阻，另外，普通大众也需要无公害食品。因此，对β-受体激动剂的分析研究在临床药物代谢动力学上、体育运动中，以及食品安全方面都有重要意义。目前，对β-受体激动剂的分析方法有高效液相色谱法（HPLC）、高效液相色谱－质谱法（LC/MS）、酶联免疫法（ELISA）、气相色谱-质谱法（GC/MS）等。

表1. 流动相梯度洗脱条件

本文建立了猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋等动物源性食品组织中特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗、喷布特罗、心得安共10种β-受体激动剂的LC-MS/MS残留检测方法。

仪器与试剂

TSQ Quantum三重四极杆串联质谱仪（赛默飞世尔科技公司），配置有电喷雾电离源（ESI）；Surveyor MS Pump液相色谱系统，包括Surveyor AS自动进样器。

标准品特布他林（Turbuterol）、西马特罗（Cimaterol）、沙丁胺醇（Salbutamol）、非诺特罗（Fenoterol）、氯丙那林（Clorprenaline hydrochloride）、莱克多巴胺（Rackdopamine）、克伦特罗（Clenbuterol）、妥布特罗（Tulobuterol）、喷布特罗（Penbuterol）、心得安（Propranolol）纯度均大于98％。用甲醇溶解并配制成1.0mg/ml标准储备液，再根据需要稀释成适当含量的混合标准工作液。其他试剂均为HPLC色谱纯。

样品制备酶解

准确称取经均质化的动物源性样品2g（精确到0.01g）于50ml离心管中，加入0.2mol/L乙酸铵溶液（pH5.2）10ml，然后加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶40μl，涡旋混匀3min，于37℃下水浴避光振荡16h。

提取

样品酶解后放置至室温，涡旋混匀3min，高速离心10min（10000rpm），取出上清液于另一50ml离心管中，加入1mol/L高氯酸溶液1ml，涡旋混匀，高速离心10min后，转移上清液至另一50ml离心管内。

净化

用MCX固相萃取柱进行SPE净化。用甲醇5ml活化固相萃取柱后，上样，抽干，然后用5％氨水甲醇溶液5ml洗脱。洗脱液在40℃下N2吹干，以20％乙腈水溶液1.0ml溶解残渣，过0.45μm滤膜，供LC/MS/MS法测定。

色谱、质谱条件

色谱条件

为Thermo Hypersil Gold（150×2.1mm，5μm）；梯度洗脱见表1，其中A：水（5mM乙酸铵），B：甲醇；流速：250μl/min；进样量：10μl。

质谱条件

电喷雾电离源（ESI），正离子模式；选择反应监控（SRM）扫描模式，喷雾电压为4500V；离子传输管温度为350℃；氮气作为鞘气和辅助气，其中鞘气为30arb，辅助气为5arb，氩气用作碰撞气，碰撞压力为1.5mTorr;选择反应监测（SRM）离子对见表2。

表2. β-受体激动剂类药物的SRM质谱条件

结果与讨论

方法灵敏度（定量限，LOQ）

本方法中，沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗、喷布特罗和心得安在猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋等动物源性食品组织中的定量限均可达0.1μg/kg，西马特罗、特布他林为0.5μg/kg。图1为得到的典型LC/MS/MS色谱图。

方法准确度

本方法中，β-受体激动剂药物在猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋等动物源性食品组织中的提取回收率均可达75%~120%，可满足国内外的最低检出限要求，并且定量定性准确，重现性好。

结论

本方法建立了β-受体激动剂药物在猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋等动物源性食品中的LC/MS/MS检测方法，其基本原理为：组织样品中的β-受体激动剂残留药物经酶解，用高氯酸调节pH值后，在酸性条件下沉淀蛋白，上清液再用MCX固相萃取柱净化，高效液相色谱－串联质谱（LC/MS/MS）法检测。方法灵敏度、提取回收率、重现性等均满足国内外监控和检测要求。