本文采用Rigol Compass C18、Rigol Compass C18 （2）和Agilent Poroshell 120 EC C18三种 分离测定红参中的人参皂苷Rg1、Re和Rb1。方法准确、重复性好，均可达到药典要求。

红参的主要活性成分包括人参皂苷Rg1、Re和Rb1，常规分析主要用HPLC-UV法、HPLC-ELSD法，多使用250mm×4.6mm×5μm或150mm×4.6mm×5μm 。本文采用Rigol Compass C18 、Rigol Compass C18(2) (及Agilent Poroshell 120 EC C18 三种 对红参进行分离。

实验方法

仪器与试药

RIGOL L-3000液相色谱仪，电子天平，超声波清洗仪。人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1，红参，乙腈，甲醇，超纯水，正丁醇，三氯甲烷。

对照品及供试品溶液制备

精密称取10.1mg人参皂苷Rg1、9.9mg人参皂苷Re、10.3mg人参皂苷Rb1至10ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容。取红参粉末1.001g，置索氏提取器中，加三氯甲烷100ml，加热回流3h，药渣挥干溶剂，移入锥形瓶中，精密量取水饱和正丁醇50ml，密塞，超声提取30min滤过，弃初滤液，精密量取续滤液25ml蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，用0.22μm滤膜过滤。

结果与讨论

常规 测试结果

采用常规 分析条件的方法1、2对红参样品进行测试分析（色谱图见图1、测试结果见表3），通过人参皂苷Rg1、Re和Rb1对照品溶液，确定1#为人参皂苷Rg1，2#为人参皂苷Re，3#为人参皂苷Rb1。结果显示：理论塔板数以人参皂苷Rg1峰计，均大于9000，人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的分离度均大于2.2。

采用Rigol Compass C18、Rigol Compass C18（2） 进行红参中人参皂苷的分离，可达到中国药典的要求。

快速 测试结果

新型的表面多孔颗粒高效液相 能在高效液相色谱的压力范围内实现高效率、高分离度的快速分析。本文中使用的Poroshell 120 由2.7μm颗粒填充，可实现相当于亚2μm颗粒填充 80%~90%的性能，反压却低将近50%。

根据公式1计算从150mm×4.6mm×5μm常规 转换成100mm×4.6mm×2.7μm 后的梯度洗脱时间。根据方法3进行红参中的人参皂苷Rg1、Re和Rb1分离（色谱图见图2、测试结果见表4），人参皂苷Rg1、Re的分离度达2.679，理论塔板数以人参皂苷Rg1峰计为14385，系统压力最大值为207bar，分析时间可由原来的100min减少至67min。

公式1，其中：Timecol.i：梯度洗脱时间（i=1、2）；Volumecol.i： 柱体积（i=1、2）Poroshell 120 因为具有极小的粒径分布和扩散路径，减小了轴向和纵向扩散，大大提高了柱效。该 具有更高的分离效率，在更高流速条件下，仍保持分离性能。故提高流速至2ml/min，根据公式2算出理论梯度洗脱时间。根据该方法进行红参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的分离（色谱图见图2、测试结果见表4）。人参皂苷Rg1、Re的分离度达到2.501，理论塔板数以人参皂苷Rg1峰计为11192，此时系统压力最大值达到449bar，分析时间由原来的67min减至34min。

公式2，其中：Timecol.i：梯度洗脱时间（i=1、2）；Flowcol.i：流速（i=1、2）

的选择

本实验选择了3种 ，对于常规 Rigol Compass C18 (250mm×4.6mm×5μm)和Rigol Compass C18（2）(150mm×4.6mm×5μm)，人参皂苷Rg1和Re的分离度均达到药典要求，方法重复性好，但分析时间过长，在质控、含量测定时消耗了大量时间与资源。选择Agilent Poroshell 120 EC (100mm×4.6mm×2.7μm) 时，方法重复性高，分离度好，分析时间减少至67min，反压仅为207bar，适用于大部分HPLC。Poroshell 在高流速下仍保持较高的分离效率，故调高流速至2ml/min，相应转换梯度分离条件。提高流速后，人参皂苷Rg1和Re的分离度达到2.501，分析时间仅为34min。

色谱条件的优化

本实验在测试过程中发现系统反压随着进样次数的增加而逐渐增加。进行红参重复性测试后，人参皂苷Rg1、Re、Rb1的定性重复性分别为0.29%、0.15%、0.03%；定量重复性分别为0.33%、0.37%、0.28%。因红参样品基质复杂，而药典中给定方法有机相组成最高时为40%，随着进样次数的增加，有些杂质不能完全从 中洗脱，造成了反压逐渐增大的现象。当在原有方法基础上添加高有机相（90%B）洗脱10min后测试，人参皂苷Rg1、Re、Rb1的定性重复性分别为0.11%、0.06%、0.05%；定量重复性分别为0.19%、0.17%、0.16%。优化过的色谱条件一方面提高了谱图重复性，另一方面提高了 的耐用性。

小结

采用3种 进行红参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的分离均可达到药典要求，且梯度时间由100min减至34min，大大提高了效率并节省了溶剂，为红参的质控提供了一定依据。