Venusil HILIC法测定皂苷1~7的色谱图。

本文采用亲水作用高效液相色谱法（HILIC）测定了七种川续断皂苷的含量，并对方法的精密度、最低检出限、重复性、稳定性进行了研究。本方法解决了以十八烷基硅胶键合为填充剂的 分离效果差的问题，方法准确，灵敏度高。

川续断是科川续断属植物川续断的根，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效，《神农本草经》将其列为上品。用于胎漏、胎动不安、滑胎、腰膝酸软、跌打损伤、骨折等症。有效成分为川续断皂苷。近年，国内对川续断的研究日趋增多，已见有川续断皂苷的提取纯化、药理和临床方面的报道；但在质量控制方面由于川续断中七种皂苷极性较大，并且结果相似，在用高效液相色谱进行含量测定时，在普通C18进行反相色谱法常遇到分离效果不理想的现象。

本文采用亲水作用高效液相色谱法（HILIC），建立了HPLC法检测川续断中七种皂苷的含量，该方法能够较好地分离川续断中的七种皂苷，方法准确、简便、重现性好、峰型对称，可作为控制川续断质量的方法。

实验方法

色谱条件

，Venusil HILIC丙基酰胺键合硅胶 ，4.6×250mm，5μm （天津博纳艾杰尔科技有限公司）；流动相，乙腈：水=75:25；柱温，室温；流速，1.0ml/min；检测波长，210nm；进样量，10μl。

样品制备和测定

供试品溶液：量取川续断适量，将其粉碎成为100目得粉末，精密称取川续断粉末10g，置于100ml量瓶中，加甲醇5ml溶解，振摇10min，加水50ml振摇20min，加水稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试品溶液。

对照品溶液：精密称取川续断七种皂苷标准品细粉各10mg，置于100ml量瓶中，加甲醇50ml溶解，振摇10min，再加50ml甲醇至刻度，摇匀，过滤，作为标准品溶液。

精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果与讨论

由于有关药效性文献报道皂苷-5药效最为明显，本文将皂苷-5作为评价最低检出限、精密度、重复性、稳定性、加标回收率、线性范围的目标峰。

的选择

分别选择用十八烷基硅胶键合为填充剂的 C18 A和C18 B，以及以丙基酰胺键合硅胶为填充剂的 Venusil HILIC，在相同的色谱条件下，对同一样品进行色谱分析，以七种皂苷的分离度作为考察对象。实验结果显示，用十八烷基硅胶键合为填充剂的 第3、4组和6、7组糖苷无法分开，以丙基酰胺键合硅胶为填充剂的 Venusil HILIC，利用亲水作用色谱法能够将第3、4组和6、7组峰分开，峰型较好，因此选择采用亲水作用色谱法测定川续断七种皂苷的含量。

流动相的选择

实验中考察过乙腈含量对实验结果的影响，由于采用亲水正相色谱方式，随着乙腈浓度的增加分离度增加，保留时间增加，峰宽增加。实验表明，当乙腈：水=75:25时，峰型最为理想，分离度达到2.0以上。

最低检出限

取皂苷-5 12.5 mg，置25ml容量瓶中，加流动相不断稀释进样，记录峰面积，使峰高大约为基线噪音的3倍，记录色谱图。结果表明，在上述色谱条件下皂苷-5的检测限为5ng。

精密度

取川续断皂苷-5标准品10mg，20mg，50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，定容。分别取此三种浓度的溶液各10μl，照上述色谱法各进样6份，测得三种浓度主峰峰面积RSD分别为（RSD=0.13%），（RSD=0.10%），（RSD=0.11%），平均RSD=0.11%。

重复性

取同一批川续断粉末样品5份，各5g。精密称定，置50ml烧瓶中，加甲醇超声溶解30min，过滤，将续滤液置于50ml量瓶中用甲醇定容至刻度。精密吸取10μl注入液相色谱仪，分别测定川续断皂苷-5的含量，结果表明，该方法的重复性较好。

稳定性

在不同时间段考察川续断甲醇提取液的稳定性，室温放置考察日间差异，过夜时密闭放置于4℃冰箱中，考察日间差异。

取川续断甲醇提取液10ml，精密吸取10μl注入液相色谱仪，分别测定不同时间川续断皂苷-5的含量。结果表明川续断样品溶液稳定。

加标回收率

采用加标回收方法验证方法的准确性，取批川续断粉末5g。精密称定，置50ml烧瓶中，加甲醇超声溶解30min，过滤，将续滤液置于50ml量瓶中用甲醇定容至刻度。准确续滤液5份，精密加入标准品适量，按照含量测定方法进样测定，并计算回收率。实验结果表明加标回收率良好，证明该方法测定川续断的含量可行。

线性范围

精密称取川续断皂苷-5标准品10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，定容。分别取此五种浓度的溶液按照含量测定方法各进样10μl，测定。以标准品浓度为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程为：Y=541457X+20329，R2=0.9998。线性关系良好。

小结

本文针对川续断皂苷的化学性质，采用亲水正相色谱法（HILIC）建立了川续断中七种皂苷的检测方法。以皂苷-5作为评价标准，研究了方法的最低检出限、精密度、重复性、稳定性、加标回收率、线性范围。方法解决了常规C18分离方法分离效果差的现象，该方法可以作为川续断皂苷的质控方法。