紫外分光光度法测定蛋白质含量

互联网 0 2020-05-27

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紫外分光光度法蛋白质定量

考马斯亮兰G250与蛋白质结合，在0-1000ug/ml范围内，于波长595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250与蛋白质结合迅速，结合产物在室温下10分钟内较为稳定，是一种较好的蛋白质定量测定方法。

　　1. 实验部分

　　1.1 仪器与试剂：

　　Labtech UV POWER紫外分光光度计;玻璃比色皿一套;考马斯亮蓝G250;

　　牛血清蛋白;超纯水。

　　1.2 试液的制备：

　　牛血清蛋白标准溶液(1000ug/ml)的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。

　　考马斯亮兰G250试剂称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95%的乙醇后，加入120ml85%的磷酸，用水稀释至1升。

　　2. 结果与讨论

　　2.1 校正曲线的绘制

　　准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度

　　为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

　　2.2 精密度

　　配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。

　　表1 精密度测定结果

次数	1	2	3	4	5	6	RSD%
A	0.2626	0.2622	0.2620	0.2628	0.2629	0.2626	0.13

　　2.3 稳定性

　　取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化如下表2。

　　表2 稳定度测定结果

　　3. 结论

　　该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法。

内容来源：互联网

责任编辑：展源

审　　核：何发