HPLC的维护与使用注意 -

HPLC的维护与使用注意

互联网 0 2020-05-27

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HPLC 维护使用

HPLC以它定量分析结果准确、分析周期短、分析范围广及分析检测限低等优势，在食品添加剂、药物成分分析等多领域得到了广泛的应用。本文就液相色谱仪在实际操作时应注意的事项及维护做了简单介绍。

　　主要部件介绍

　　输液系统

　　输液系统主要包括在线脱气装置、高压输液泵、梯度洗脱装置。在线脱气装置主要功能是流动相在进入柱子前排除气泡。高效液相的填料颗粒小，通过 2~5 mm 的受到的流动阻力很大，因此需要通过高压输液泵抽取流动相输送至。

　　高压泵按输液性能可分为恒压、恒流泵。按机械结构可分为：液压隔膜泵、气动放大泵、螺旋注射泵和往复柱塞泵。

　　进样器

　　进样器是将分析样品送入的装置，分为手动、自动进样器两种。手动进样器一般配有20~100μL的定量环。

　　以液体为流动相，以广义的固相为固定相来进行分析样品的分离工作。

　　按照分离模式大致可以分为正相和反相。

　　检测器

　　检测器是将分离出样品的物理或化学特性转换为可以测量的电信号，通过色谱图记录下来，由色谱图中的峰形状判断分离效果，依据标物、分析样色谱图的出峰时间、峰面积分别对样品进行定性定量分析。

　　维护及使用注意事项

　　1.开关机操作注意

　　分析准备工作做好后，依次打开稳压电源、高压输液泵、柱温箱、检测器，待各部件自检结束，打开连接仪器的电脑，启动工作软件。分析工作结束后，关闭工作软件，再依次关闭检测器、柱温箱和高压输液泵。

　　2.对流动相的要求

　　为保证液相色谱仪器的正常使用，所有流动相必须是色谱级的，且经过过滤杂质、排除气泡后装入干净的流动相贮存瓶中待用。

　　(1)流动相的物理化学性能要求

　　对分析物要有足够的溶解能力，以利于提高检验的灵敏度;流动相的黏度要小，以保证合适的柱降压;流动相的沸点要低，以利于制备分离时样品的回收;流动相的 PH 值一般应在 2~7.5;使用期限不得超过 2 天，否则产生细菌污染管路。

　　(2)流动相的过滤

　　流动相在使用前都必须经过滤，以除去杂质微粒。同时要定期清洗吸滤头，以防杂质通过其进入流动相。应依据其是否是水溶性选择水膜或有机膜(0.45 μm 或 0.22 μm)，使用溶剂过滤装置，通过真空泵抽气过滤。

　　(3)流动相的脱气

　　流动相必须预先脱气，否则易产生气泡，影响泵的工作。此外，溶解在流动相中的氧能与某些有机溶剂形成有紫外吸收的络合物，提高背景吸收，会在梯度洗脱时造成基线漂移或形成鬼峰。常有的脱气方法有在线真空脱气法、超声波脱气法、抽真空脱气法三种。

　　3. 的维护及使用注意事项

　　所有分析样品最好把pH值调节到适合的pH值范围内。进样要避免超负荷，这是保持性能持久良好的重要方法之一。手动进样器进样的话，进样时动作要快速准确。分析物成分复杂时，要在前加色谱保护柱以保护。每次分析工作开始时，要对进行平衡，用含10%流动相中的有机溶剂的水溶液进行排气和冲洗和管路，冲洗30分钟左右，将中的纯有机溶剂替换掉，然后再用至少10倍柱体积的流动相平衡，直至基线平衡后方可进样。

　　每次分析工作结束后，一定要立即用一定量的水溶液彻底冲洗中的缓冲盐液，再用对被测物洗脱能力强的溶剂来冲洗，冲洗时间不能小于1小时，洗脱溶剂的用量至少为柱体积的20倍。若不及时冲洗，杂质长时间积累在其中，易堵塞，降低柱效性能。长期这样，会加速减少使用寿命。 4天以上不使用，应从仪器上取下，用封头螺帽把两头紧紧密封。保存时注意不要强烈震动、碰撞。

　　4.高压输液泵的维护及使用注意事项

　　每次分析工作结束后，都应及时清洗泵。当有缓冲盐做流动相时，缓冲盐与有机溶剂互相交换前一定要用5%的甲醇水溶液清洗泵，防止盐在有机相中结晶损坏泵中各组件。缓冲盐溶液的浓度不要过高，要控制在5%以下，否则高浓度的缓冲盐会磨损密封垫和活塞，降低其使用寿命。长时间使用高浓度的缓冲盐，必须用10%的异丙醇色谱级溶液清洗泵，从而保护柱塞和密封垫。

　　输液泵工作前要设置工作压力范围，正常工作压力一般不要超过 30 Mpa，否则经常高压会使密封环变形，产生漏液。平时分析工作要养成记录压力的好习惯，这样如果工作压力超过平时正常压力的10%~15%，就应及时查找原因。

　　5.紫外检测器的维护及使用注意事项

　　紫外检测器有一定的使用寿命，所以平时应尽量减少氘灯的使用时间，在柱平衡进行一大半之后，在走基线之前，打开检测器光源;分析结束后即可关闭检测器光源。要保持检测器四周环境清洁，尽量少开窗户，定期地面进行吸尘工作，防止检测器工作时由于静电吸附灰尘颗粒覆盖在光学元件上。检测器池内存在气泡就会产生噪音，噪音会干扰定量分析，所以流动相须充分脱气后再使用。

　　应定期清洗流通池。如观察到流通池内部无气泡或脏物，应清洗流通池。通过注射器用异丙醇等有机溶剂冲洗池内，以清洗透镜。如是含有缓冲盐的溶剂作流动相，应在使用异丙醇冲洗前用水替换池中原先有的溶剂。

内容来源：高效液相色谱

责任编辑：展源

审　　核：何发