经常使用色谱仪常会碰到这样的问题,什么时候该换 了? 的塔板数能体现 的状态吗?确定表明一支 应该“退休”的标准,从经验来看,当一支 的塔板数降低到新柱子时的百分之多少时就可以认为该 不能再使用了呢?在您的 里是如何判断一根 不可以再用了呢?
相信每个色谱工作者都会关心分辨率,分辨率是考察一根 分离具体样品的好坏程度的指标。色谱的核心任务就是为了使每个峰完成分离,我们在实际工作中需要得到合理峰宽的窄峰以便获得较低的检测限(这已经不是什么难题,现在的 都可以达到这个要求)。
较好的方法是使用压力、分辨率和峰形的混合指标来考察一根 的状态。压力的测量是最容易的,通常我们确定的色谱方法要满足以下的要求:用新柱子时柱压不高于2500psi,在任何情况下压力都不超过3000psi。尽管现代的液相色谱系统都可在更高的压力下使用,但由于高压产生的系统损耗和泄漏的问题会很严重。当压力超过3000psi时,考虑更换进样器和 之间的0.5mm孔径的在线滤片。如果更换滤片后压力仍然高,则 的滤片或者是 已经被污染,这提示我们该换柱子了。有统计表明,超过60%的 损坏是由于压力过高的原因。
分辨率是我们考察 的一个非常重要的指标,只要两个组分可以获得基线分离,对该分析物的定量就不会有什么问题。对于对称的高斯峰来讲,1.5的分辨率即可得到基线分离;若Rs在1.7至2.0之间则更好。若峰拖尾严重则需要更高的分辨率。使用分辨率作为 的评价指标的好处在于我们可以直观地看到相邻的峰的分离情况。
另外一个考察 质量的标准是峰形拖尾情况,厂家测试报告的峰形都非常漂亮,但这并不代表该 分析实际样品的情况。实际样品中总是含有或多或少引起峰形拖尾的组分。最值得一提的是含有氮原子的化合物,这些化合物和硅胶骨架上的游离硅羟基结合非常紧密,随着 使用时间越长,键合相流失,拖尾则更加严重。然而拖尾情况的改变不像分辨率的改变那样能够马上看出来。基于此,最好定一个拖尾因子的上限,如美国药典规定拖尾因子不超过1.8。
确定 “抛弃”标准的最佳时间是当我们开发分析方法或作方法认证的时候。通常,在开发分析方法的过程中你会试验几根 ,分析足够多的实际样品,你知道当分离变差的时候是什么样的情况。我倾向于在开始时使用一个宽的范围。我们的经验是这样的:你如果在开始时紧缩系统适用性要求,在方法认证后再放宽这个要求是很困难的。在分析实际样品之前进行系统适用性考察,以确保该色谱方法满足分析者可以接受的标准。
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