磁珠VS纯化柱，哪种纯化工具更适合你的样品？

赵桂芝 0 2022-11-09

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磁珠纯化免疫亲和

做过蛋白纯化的小伙伴都知道，想要高纯度且具有生物学活性的目的蛋白，前处理后的粗提、精提、保存样样需斟酌，一言不合就失败。哪种方法更适合你呢？今天跟小析姐一起来了解下磁珠纯化与免疫亲和柱吧。

亲和层析法纯化蛋白质是基于不同分子间的结合亲和力，以达到分离蛋白质的目的。对于标签蛋白纯化而言，带标签的重组蛋白会与配体结合，不带标签的蛋白质则不结合（后续通过洗杂步骤除去）。

在纯化时，我们通常会使用到多种形式的树脂填料(resin)。它们往往由偶联了不同的配体的层析介质组成，如磁珠和琼脂糖珠。琼脂糖珠形式的填料则被预装在不同的工具里，像小离心柱、重力柱、或者用于自动纯化的HPLC/FPLC上机柱。

这些多种多样的纯化工具满足了不同的实验需求，提供了诸多便利的同时，何时该选择何种工具，哪种更适合我们的样品呢？

此篇文章中我们为大家介绍两种选择策略以及每种形式的优点。

选择时，可以通过蛋白产量与样品体积两方面着手：

根据蛋白产量选择

根据需要的目的蛋白产量从µg到mg，搭配不同的纯化工具形式。

（1）重力柱

重力柱常用在需中等产量的蛋白质纯化中。市面上通常有预装好的重力柱和瓶装的填料悬液可以选择。根据实验需要可从瓶装填料中取适当体积，自己手动装柱。

（2）磁珠

可使用磁珠搭配EP管或 96 孔板进行批量纯化，非常适用于pull-down、IP 和 Co-IP实验。磁珠纯化省时简单，通过用磁力架中的磁铁吸附管中的磁珠，将磁珠固定在管壁上，后续即可进行移液操作。好处是可以跳过离心步骤，而且移液过程中不用担心损失样品。

根据样品体积选择

根据不同的样品体积，可以考虑如下的选择方式：

FPLC/HPLC上机柱

适用于自动纯化设备 FPLC/HPLC（如 Äkta®）的大量样品纯化。市面上有多种规格的上机柱可选，而且可以通过串联的方式连接上机柱，来增加结合蛋白质的能力。全自动的蛋白质纯化方法可以快速的从大量样品中纯化目的蛋白，节省时间。通过进行设置，设备会自动加入相应体积的缓冲液和样品，在各纯化步骤中无需等待。同时还可以记录下来完整的亲和层析实验，提供有关纯化质量的信息，可重复的纯化结果。