液相色谱样品预处理要注意哪些问题？

赵敏 0 2023-05-18

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样品预处理

一般情况下，样品在进行分析之前都需要进行预处理，样品预处理的同时也会带来一些问题，如，样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等，液相色谱样品预处理要注意哪些问题呢？

样品预处理应包括进样前的一切操作，除了称重、溶解、稀释等步骤外，样品需要：

①过滤；

②萃取；

③衍生化(柱前衍生)；

④液相色谱(低压柱层析)；

这些操作可以是手工进行或实行自动化操作，样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集)、保护等。样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障，其中，样品萃取是关键的一步，要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。

有些样品经预处理后还不能作进样分析，需进行衍生化处理，使一些无紫外吸收或无荧光的组分，经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度，又改善了分离度(质量变化)。样品预处理的同时也会带来一些问题，如，样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。。。衍生反应常会影响试验的精确度，或者在整个样品预处理过程中带来误差。

用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒，有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动，检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化，就应过滤一下，过滤膜要能截留住0.15μm以上的颗粒，样品过滤的过程中可能引起：样品被污染，因过滤吸附降低样品组分的含量，样品溶剂挥发引起误差。

萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分，或者，减少损坏柱的物质(如，蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取，要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。

常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样，有时需要浓缩或吹干浓缩，再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度，同时，避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外，还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐，萃取方法如下：

水溶性样品

（1）酸性组分及生成的盐萃取方法：

有机溶剂萃取杂质后调成酸性，再加有机溶剂萃取或进样，或在N2流下吹干，用适当的溶剂解后进样。

（2）碱性组分及生成的盐萃取方法：

有机溶剂萃取杂质后调成碱性，再加有机溶剂萃取或进样，或在N2流下吹干，用适当的溶剂溶解后进样。

（3）中性组分萃取方法：

①有机溶剂萃取杂质后，直接用反相色谱法分析；

②脂溶性组分萃取方法:有机溶剂萃取或进样，或在N2流下吹干，用适当的溶剂溶解后进样；

分析中的污染

一般检测的环境、容器、试剂都是影响测定结果的因素。

①环境污染仪器室的有害气体、气溶液、灰尘等等都能造成污染，影响检测结果，这种污染很难校正。因此，仪器室与其他应隔离，保持清洁，仪器室内应安装空调，注意：防潮、防腐、防震、空气相对湿度应小于70 %为宜。

②容器常用的器皿有玻璃类、瓷类、石英类、塑料类等，在进行分析时，应按照待则样品的要求来选则器皿，不管使用哪种器皿，容器的洗条清洁都是很重要的，也是取得好的检测结果的基本保证。