液相色谱中缓冲盐的正确使用方法

赵桂芝 0 2023-11-20

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液相方法很多用到缓冲盐，那么缓冲盐应该如何正确使用，使用之后应该如何冲洗，如果因使用缓冲盐出现问题时，应该如何解决？这些问题你知道答案吗？跟小析姐一起来学习吧。

流动相中缓冲盐正确使用

1、使用前的处理: 在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗，直至基线平稳。原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的(特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时)流动相进行分析时，如果分析前中用于保存的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对的损害。

2、使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。

缓冲液使用注意

1：避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。

2：缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。

3：实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。

4：使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。

5：清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。

6：长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。

7：选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。

如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好. 如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲。可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。

异常

柱压与硅胶基质的形态(如无定形或球形硅胶)、颗粒大小、填料合成条件、装柱条件、所用流动相和分析时的温度有关。不同厂家的柱压会有所差别，相同流动相和温度的条件下，不同厂家的新有的柱压可能相差4、5个MPa，特别是低端和高端之间，这一区别比较明显。这是由厂家所选用的硅胶基质及其生产条件决定的，这种差异的存在是正常的。同时需要说明的一点是，柱压与柱效有一定的关系，通常柱效高的柱压相对而言会高一点，但柱压高的并不一定就具有高柱效。

在的使用过程中柱压通常会出现两种升高的形式：

第一种是，随着使用时间的延长柱压慢慢上升，这是正常的；

第二种是，使用过程中(流动相和温度没有改变的条件下) 压力突然升高很多。这种压力突然升高的现象，通常是由工作人员操作不当引起的。

原因：1)样品太脏，使用前没有过滤，导致柱筛板堵塞；2)样品含有的杂质在流动相中的溶解性不是很好，与流动相混合后析出，导致柱塞板堵塞；3)使用缓冲盐，处理错误，缓冲盐在中析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙。

异常解决办法

对于第二种，即柱压突然升高的情况，通常有以下几种解决办法：

1)将反接，用含水比例较大的流动相进行冲洗。

2) 进样一端的筛板取下，分别放在水中和甲醇中超声或更换新的柱筛板。如果柱效没变，但柱压仍然较高，则应考虑进样端填料受污染的问题，因此除了取下进样端筛板超声外，还需要挖掉进样端的部分填料，挖去填料之前先检查一下填料的颜色，如果填料的颜色发生了变化，则应该挖掉直到见到白色的填料为止。

挖掉后将出现一个缺口，填补缺口的填料可以从另一支相同品牌、相同型号的报废的出口端获得，填料用有机溶剂如甲醇等调成糊状装入缺口处，压紧刮平，再装上筛板。

责任编辑：展源

审　　核：何发

液相色谱中缓冲盐的正确使用方法

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