薄层色谱使用注意事项，超全！ -

薄层色谱使用注意事项，超全！

展源 2025-07-14

薄层色谱使用注意事项，超全！

薄层色谱分析法，是利用各成分对同一吸附剂（如硅胶）吸附能力不同，使得流动相（溶剂）流过吸附剂过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分互相分离。在化工领域中，有一种层析分离技术非常出名，就是薄层色谱法，也叫薄层层析，这是一种快速分离化学物质的最有效层析方法，它的工作原理就是利用吸附各成分，使其达到互相分离的目的。针对此种技术，今天小析姐就来给大家介绍一下薄层色谱法的5个步骤、rf值、用途及注意事项。

薄层色谱法的5个步骤

步骤一：薄层板制备

图1 薄层板

除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中， 在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2～0.3mm) ，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。手工制板一般分不含粘合剂的软板和含粘合剂的硬板俩种。步骤二：薄层板的活化

硅胶板于105-110℃烘30分钟，氧化铝板于150-160℃烘4小时，可得活性的薄层板。步骤三：点样

图2 点版

点样方式：分为手动点样和自动点样。手动点样主要器具为微量毛细管、微量注射器等。自动点样采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。手动点样灵活方便，常用于各种TCL鉴别中，器具以微量毛细管最常用。仪器的自动点样准确性好，常用于薄层扫描法的含量测定。点样方法：分为接触式点样和喷雾点样。喷雾点样为仪器控制，在此不展开描述。接触式手工点样时，应注意小心用点样器垂直接触薄层板表面以防止损伤板面。若薄层吸附剂表面被损坏或点成洼孔，则展开后斑点成不规则形状；靠近溶剂前沿的化合物形成三角形，靠近原点的化合物形成新月形，影响测定结果。原点损失带来误差，也将使展开后的定量和判断不准确。步骤四：展开展开剂的配制：配制展开剂时，应严格控制其比例准确度，如遇到比例很小的溶剂时，应尽量满足其精确度要求，而不是为图方便省事直接用滴管加入。展开剂配好后如果浑浊不清，不能立即使用。应转移入分液漏斗中，待其静置分层澄清后再取其上层(或下层)液进行展开。步骤五：显色

薄层板显色方法有哪些？主要有三种方法，分别是蒸汽显色法、物理显色法和试剂显色法。薄层色谱法的rf值

rf值指的是溶质移动的距离/溶液移动的距离。表示物质移动的相对距离。各种物质的Rf随要分离化合物的结构，滤纸或薄层板的种类、溶剂、温度等不同而不同，但在条件固定的情况下，Rf对每一种化合物来说是一个特定数值。薄层色谱法的用途有哪些？主要有以下三大用途，一起来看看吧！用途一：快速分离两种物质；用途二：鉴定少量有机物的组成；用途三：跟踪反应进程。

薄层色谱注意事项

薄层色谱法的注意事项有哪些？主要有以下几个注意事项。

图3 展板

注意事项一：所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整；

注意事项二：铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在110℃活化30分钟，置于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用；

注意事项三：点样点一般为圆点，不能太大。

TLC操作方便，高效，在有机合成中主要有以下作用：

1、反应原料

投料前判断原料纯度。

2、监控反应

反应是否有新点生成。

原料是否反应完全。

3、后处理

通过TLC预先判断后处理（如淬灭、中和）方法的合理性，例如：是否破坏产物。

萃取、结晶等后处理过程的监测。

4、选择柱层析的洗脱条件

待分离组分Rf值在0.2左右的展开剂比例为洗脱剂的合适值。

5、初步判断反应产物的纯度

5%以上的有紫外吸收的杂质通常在TLC中都可以观测。

图4

TLC 也是一项考验技术的分析方法，在使用薄层板的过程中，我们通常会遇到一些问题，小编进行了总结并给出了一些解决的方法，供大家参考：

（一）官能团转化与展开剂极性变化关系

官能团转化

1，极性增大：

RNO₂→NH₂

RNHBn (Boc, Cbz)→RNH₂

RX→RCN

RCHO（R-X）→CH₂OH

2，极性减小：

R-OH→R-X (Cl, Br, I)

RCOOH→RCO₂R

RC-NH₂→RC-H

随着反应官能团的转化，当产物极性变化比较大，在TLC中Rf＜0.2时，为了准确判断，展开剂极性需要适当增大，反之，当极性变小Rf＞0.6，展开剂极性需要适当调小。展开剂配比需要结合官能团的极性大小去调试,具体调试方法见下图：

图5 展开剂

图5，展开剂体系调试

常用一般极性的体系：PE/EA。

常用极性较大的体系：DCM/CH₃OH。

当常用体系对某些化合物分离度不明显时，某些溶剂间按一定比例混合可能会有比较好的分离效果：

PE/DCM,PE/Acetone,Toluene/Acetone,DCM/EA,EA/CH3OH等。

PS：有些反应产物极性变化很小（RCH3→RCH₂X），可能需要单向多次展开。

小编给大家整理常见官能团与溶剂极性变化关系：

附1：常用官能团极性比较

烷烃（-CH₃,-CH₂-）＜烯烃（-CH=CH-）＜醚类（-OCH₃，-OCH₂-）＜硝基化合物（-NO₂）＜二甲胺（-N(CH₃)₂）＜脂类（-COOR）＜酮类（-CO-）＜醛类（-CHO）＜硫醇（-SH）＜胺类（-NH₂）＜酰胺（-NHCOCH₃）＜醇类（R-OH）＜酚类（Ar-OH）＜羧酸类（-COOH）。

附2：常用展开剂极性顺序

石油醚＜甲苯＜二氯甲烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜正丁醇＜四氢呋喃＜二氧六环＜丙酮＜甲醇＜乙腈＜水。

（二）拖尾现象及解决方法