高效、准确地测定大批量溶出度样品 -

高效、准确地测定大批量溶出度样品

0 2020-05-27

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目前，测定固体制剂的多条溶出曲线愈发受到关注，其在药品研发、质控与内在质量评价上已发挥出举足轻重的作用。而如何实现大批量溶出度样品的高效、准确、快捷的测定，一直困扰着分析人员。本人在多年工作经验基础上进行了梳理与归纳，提出以下思路与见解，供大家参考。目前，测定固体制剂的多条溶出曲线愈发受到关注，溶出度在药品研发、质控与内在质量评价上已发挥出举足轻重的作用。

目前，测定固体制剂的多条溶出曲线愈发受到关注，其在药品研发、质控与内在质量评价上已发挥出举足轻重的作用。而如何实现大批量溶出度样品的高效、准确、快捷的测定，一直困扰着分析人员。本人在多年工作经验基础上进行了梳理与归纳，提出以下思路与见解，供大家参考。

目前，测定固体制剂的多条溶出曲线愈发受到关注，溶出度在药品研发、质控与内在质量评价上已发挥出举足轻重的作用。而如何实现大批量溶出度样品的高效、准确、快捷的测定，一直困扰着分析人员。解决这一问题有以下几个方法。

采用错时投样

对于片剂/桨板法的测定，为使手动取样时不至“手忙脚乱”，采取间隔固定时间（如30s）的投样方式，这样便可做到平行操作、从容不迫了。

手动抽取样品

建议采用“1个滤头/1个取样针筒方式”进行多样品抽取。第1份样品抽取10~20ml后，过滤使滤膜吸附饱和，并将滤液沿溶出杯壁缓慢注回，再抽取所需体积（如HPLC法只需1~2ml）即可，其后所有样品无需再弃去初滤液，直接收集。至于对样品间污染的担忧，由于针筒内残余量很少，故误差完全可忽略。强烈建议：不要采用“分别滤头/分别针筒方式”，既浪费人力和物力，又会给试验带来较大误差。

尽可能采用HPLC测定

现今，由于国产辅料质量参差不齐，在紫外处有吸收的较多，其中薄膜衣/肠溶衣/糖衣/胶囊壳更为严重，导致紫外法测定时经常出现溶出度均值高出含量10%~30%的情况。同时，由于原研参比制剂的辅料一般无法获得，故辅料对测定结果的干扰更将无法评价。

因此这里建议采用HPLC测定法。因为绝大部分辅料都是惰性的，在反相上不会出峰，即便出峰保留时间也较短，故皆不会干扰主成分测定。另外，由于HPLC法线性范围宽，样品均可直接进样测定，省略了紫外测定吸收度值需在0.20~0.80以及样品稀释的繁琐步骤，大大提高了工作效率。

如今，一些自动溶出仪收集器已可直接接收于液相小瓶内，且由于附带了加垫片的盖儿，可防止采集过程中小瓶内液体挥发，非常方便。

如采用紫外法测定，为尽可能排除干扰，建议采用双波长相减法（最大吸收波长与远端无吸收波长）。但如样品是手动操作测定，这将极其繁琐。而光纤溶出仪便通过采用双波长相减法，将光纤探头直接插入溶出杯中即时测定，值得肯定与推荐。但该法使用的前提是：辅料干扰呈一“平行线”。

为了提高HPLC的测定效率，以下是几项建议：

样品处理

由于HPLC法测定需样品量少，每一时间点的取样量1~2ml即可，因此，对于小规格制剂（不超过10mg），建议样品溶液经手动取出后无需过滤，直接置于液相小瓶中，放置0.5h即可进样测定。因为在取样点位置处，吸取这么小体积携带出辅料的可能性极小，即便有少量存在，静置后使其沉淀，也不会影响到测定，更不会堵塞。这样，还可省略去溶出量累积计算的繁琐以及过滤时滤膜吸附的担忧，起到事半功倍的效果。

该法尤适用于采用自动取样装置时，管路与滤膜有吸附样品的情况，此类多为小规格/难溶制剂，主成分进行了微粉化处理，比表面能较大，故易出现该情形。

调节流动相，缩短保留时间

为加快测定，可提高已验证、并确定的流动相中的有机相比例。这样，虽然有杂质与主成分未能分离的问题，但考虑到样品已被稀释900~1000倍（溶出介质体积通常为该体积），在此条件下，存在的微量杂质响应值已微乎其微，即便有所体现，其影响对于溶出结果而言亦在误差范围之内，可忽略不计。

升高柱温、缩短保留时间

升高柱温至40~50℃。一般的反相最高承受温度可达80℃，在60℃以下试验毫无问题。

加大流速、缩短保留时间

流速可根据柱压的限制提高至1.5~2.0ml/min，以加快测定进程。

调整进样量

对于小规格制剂，进样量可根据对照品溶液的精密度予以灵活调节，只要仪器功能许可，100~500μl是完全可以的。需强调的是：建议采用溶出量为标示量10%浓度的对照品溶液进行精密度验证，以确保测定低浓度样品时的准确性。

以上多项措施，都是由于峰面积小，通过缩短保留时间使色谱峰“变细变尖（锐）”，或通过加大进样量来提高检测精密度。

改变检测波长

对于大规格制剂，在几近全部溶出时，由于浓度过大，会出现超载或检测器超载而导致峰形不佳的情形，此时可通过改变波长（或降低进样量至5μl）使峰面积变小，从而令色谱峰精密度满足要求。

使用超高速液相

如采用超高速液相测定，效果更好，但由于粒径较小，样品液若不过滤，恐堵塞，建议试验时验证后予以酌情考虑。

液相软件编程

对于大批量样品的数据处理，一定要充分利用仪器自带的软件功能，绝不建议将每一个峰面积输入Excel软件计算这种费时费力的方式。

现今市场上的主流品牌色谱仪皆已具有数据批量处理功能和打印功能（多张图谱结果打印在一张纸上），将这些功能掌握后一次性编辑好模板，便可大大提高工作效率。本人曾在5min内完成50个样品的数据处理（得到溶出量），每一溶出量数据直接从软件中拷贝出，粘贴至Excel软件中，画出溶出曲线图。 “工欲善其事、必先利其器”，充分掌握软件功能至关重要。

责任编辑：展源

审　　核：何发