牛乳蛋白色谱分析的最新解决方案! -

牛乳蛋白色谱分析的最新解决方案!

实验与分析 0 2020-05-27

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提到国产婴幼儿配方奶粉，很多人的印象可能还是停留在“三鹿”事件的阴影中，实际上国家今年来对于婴幼儿配方奶粉的监管是越来越严格。2016年国家出台了《婴幼儿配方乳粉产品配方注册管理办法》，对婴幼儿配方奶粉实行注册管理，被称为“史上最严”的奶粉新政，依法取得配方注册证书的企业才能进行销售。

　　所谓婴幼儿配方奶粉，是以母乳为标准，对牛奶进行全面改造，使其最大限度地接近母乳，符合婴儿消化吸收和营养需要。依照美国食物药物管理中心(FDA)规定，婴儿配方中所有成份，必须被认可为安全食物成份(generallyrecognized as safe-GRAS)，或可作为食品添加物(food additives)，才能添加在婴儿配方制造过程之中。

　　人类母乳中的蛋白质主要是乳清蛋白，含有多种生物活性组分，由酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、乳铁蛋白及免疫球蛋白等主要乳蛋白所组成，其中以α-乳白蛋白含量最高，约占母乳蛋白量的29%。科学研究指出，α-乳白蛋白是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源，具有调节蛋白质平衡，促进免疫系统发育的作用。研究证明，α-乳白蛋白与锌离子结合可以激活免疫因子，减少腹泻。此外，α-乳白蛋白富含的色氨酸是神经发育的重要因子，能够显著改善婴幼儿的睡眠质量。乳铁蛋白是母乳的核心免疫蛋白，占母乳总蛋白的20%，具有广泛的生物学活性，包括广谱抗菌、消炎、调节机体免疫反应等作用，婴幼儿服用乳铁蛋白不但能帮助其抵抗细菌等有害微生物侵袭，预防呼吸道感染及腹泻等婴幼儿常见疾病，更能促进婴幼儿的生长发育和增强造血功能。

　　母乳和牛乳中营养成分比较表

	Human	Cow
Protein（g/100ml）
total	1.1	3.3
casein	0.3	2.5
α-lactalbumin	0.3	0.1
lactoferrin	0.2	trace
IgA	0.1	0.003
IgG	0.001	0.006
Isozyme	0.05	trace
Serum albumin	0.05	0.03
β-lactoglobulin	-	0.3

　　目前国内外检测乳清蛋白的方法有：

　　o SDS-PAGE凝胶电泳法;

　　o 可溶性蛋白/凯式定氮法;

　　o 酶联免疫法;

　　o 凝胶渗透色谱-UV检测法;

　　o 高效液相-UV检测法;

　　o 毛细管电泳-UV检测法;

　　o 基于蛋白多电荷离子的液质联用法;

　　o 氨基酸分析折算法;

　　现国标(GB1903.17—2016食品安全国家标准食品营养强化剂乳铁蛋白)对于乳铁蛋白检测要求的标准品纯度为≥95%，对α-乳白蛋白和β-乳球蛋白A和B检测要求的国标的初稿还在制定中。默克公司从“婴幼儿配方乳粉产品配方注册制度”发布以来，一直致力于相关应用方案的开发。

　　α-乳白蛋白(Peak 4)分析谱图

　　β-乳球蛋白A(Peak 3)和B(Peak 5)分析谱图

　　乳铁蛋白(Peak 1)分析谱图

　　由以上谱图结果可知，基于Supelco熔融核 BIOshell^TMA400 Protein C4，可以对α-乳白蛋白、β-乳白蛋白A和B、乳铁蛋白进行定性和定量检测，也可以对相关的代谢产物进行监控。

　　附录

　　方法中应用的牛乳蛋白标准品是默克推出的全球唯一的牛乳蛋白认证参考物质(CRM)，方便广大工作者对牛乳蛋白的分析检测。

　　产品特点

　　o CRM级——具备认证参考物质定义的稳定性、均一性、不确定度和可溯源性及其认证的属性值(纯物质的重量)

　　o 稳定性，由测试数据预先判定并支持

　　o 完备的质量分析证书

　　o 其他应用-校准标准和质量控制

　　产品列表

货号	描述	质量级别	纯度	规格
L-045-100MG	α-乳白蛋白（来源于牛奶）	CRM级	98.40±0.76 wt%	100MG
L-046-100MG	β-乳球蛋白A和B（来源于牛奶）	CRM级	96.03 ± 0.45 wt%	100MG
L-047-50MG	乳铁蛋白（来源于牛奶）	CRM级	98.12 ± 1.93 wt%	50MG