实用干货：动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤

赵桂芝 0 2021-11-04

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蛋白提取

还在为蛋白质提取实验发愁吗？蛋白提取实验有诀窍，不同的提取实验操作步骤都给你总结好了，看完你就豁然开朗了，一起来瞅瞅吧。

培养的贴壁动物细胞的蛋白质抽提步骤

1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。

2、预冷的 PBS 清洗贴壁的细胞 2 次,小心倾去 PBS。

3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液,5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液)。

4、细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂(107 个细胞中加入 1ml 抽提试剂;5×106 个细胞中加入 0.5ml 抽提试剂),轻轻摇动 5 分钟。

5、用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来,转移细胞悬浮液到离心管中,冰浴下摇动 15 分钟进行裂解。

6、裂解液于预冷的离心机中 14,000xg 离心 15 分钟。弃去沉淀,上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

培养的悬浮动物细胞的蛋白质抽提步骤

1、2500xg 离心 10 分钟沉淀悬浮的细胞,弃去上清液

2、预冷的 PBS 悬浮沉淀细胞,2500xg 离心 10 分钟沉淀细胞,去上清。

3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液,5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液)。

4、加入含抑制剂的预冷蛋白质抽提试剂(107 个细胞中加入 1ml 抽提试剂;5×106 个细胞中加入 0.5ml 抽提试剂)。

5、轻轻摇动混和 15 分钟进行裂解。

6、裂解液于预冷的离心机中 14,000xg 离心 15 分钟。弃去沉淀,上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

哺乳动物组织的蛋白质抽提步骤

1、组织称重,切小块放入管中。

2、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液,5 μl PMSF 和 5ul 磷酸酶混合液)。

3、加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂(250mg 组织中加入 1ml 抽提试剂)。

4、用匀浆器每次 30 秒低速匀浆,每次匀浆间隔冰浴 1 分钟,至组织完全裂解。

5、裂解液于预冷的离心机中 14,000xg 离心 15 分钟。上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

责任编辑：展源

审　　核：何发